Определение концентрации олигонуклеотида
![ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ОЛИГОНУКЛЕОТИДА oligonukleotidi-4.jpg](/upload/medialibrary/a32/a3247dc9806d025e013424fbcbb0ff93.jpg)
Концентрация олигонуклеотида наиболее точно и легко определяется путем измерения УФ-поглощения образца при 260 нм с использованием спектрофотометра. В соответствии с законом Ламберта-Бера:
![formul2.gif formul2.gif](/upload/medialibrary/d78/d7858a89941f041b83f5a76b8bf57dee.gif)
А - поглощение (ое),
e - молярный коэффициент поглощения (М¯¹см¯¹),
С - концентрация (М),
l - длина оптического пути (см).
Измерение А производится при определенной длине волны, температуре, составе буфера, которые влияют на значение e.
Определение
Поглощение (А), измеренное при 260 нм в кювете с длинной оптического пути 1 см, равно количеству олигонуклеотида в 1 мл воды. Концентрация олигонуклеотида в растворе зависит от длины и последовательности, которые определяют значение суммарного молярного коэффициента поглощения (e).
![Вычисление концентрации oligonukleotidi-12.jpg](/upload/medialibrary/e02/e0287b4f9f413df14710b60c4b0d3bc5.jpg)
Пуриновые и пиримидиновые основания ДНК и РНК поглощают свет с максимумом в области 260 нм.
При этом бициклические основания (пурины: аденин и гуанин) более сильные хромофоры (имеют более высокий молярный коэффициент поглощения), чем моноциклические (пиримидины: цитидин, тимидин и урацил). Это необходимо учитывать при расчете концентрации, которая при одинаковом поглощении будет различаться для олигонуклеотидов разного состава.
Точные молярные коэффициенты поглащения представлены в таблице:
![tabl_koncentr.jpg tabl_koncentr.jpg](/upload/medialibrary/1d8/1d88791db4c21ca0046111d4498a7ed0.jpg)
Компания СИНТОЛ для расчета значения молярного коэффициента поглощения использует специальную программу, которая учитывает состав и последовательность Вашего олигонуклеотида и, таким образом, позволяет наиболее точно определить концентрацию олигонуклеотида в растворе.
Например, молярный коэффициент поглощения тетрануклеотида ACGT будет равен сумме попарных молярных коэффициентов поглощения:
![formul3.gif formul3.gif](/upload/medialibrary/edb/edb07637d857ef899919e8704fe9feed.gif)
![tabl_koncentr2.jpg tabl_koncentr2.jpg](/upload/medialibrary/c3a/c3a000d1c00c767d1a4bc95f76cf9589.jpg)
Для того чтобы получить концентрацию олигонуклеотида в мкг/мкл, необходимо посчитать молекулярный вес олигонуклеотида, в соответствии с его составом (значения молекулярного веса каждого из нуклеотидов представлены в таблице) и затем вычислить концентрацию по формуле:
C(мкг/мкл) = C(M) x MW
![tabl_koncentr3.jpg tabl_koncentr3.jpg](/upload/medialibrary/296/2965c26425fe2fd2997f014e8a2d3b78.jpg)
Заключение
Для каждого олигонуклеотида, который Вы заказываете у нас, в Паспорте на олигонуклеотиды приводятся значения:
- концентрации в мкМ,
- концентрации в мкг/мкл.
За дополнительной информацией об олигонуклеотидах обращайтесь к нам, компанию СИНТОЛ.
Вернуться в раздел