Набор реагентов «ОТ‑ПЦР‑РВ‑SARS‑CoV-2»

кат. № ООМ-136

Набор реагентов «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2» предназначен для качественного определения РНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ) и флуоресцентной детекцией в препаратах НК, выделенных из проб, полученных при взятии мазков со слизистой носо- и ротоглотки, мокроты, промывных вод бронхов, полученных при фибробронхоскопии (бронхоальвеолярный лаваж).

Диагностическая роль набора реагентов заключается в возможности его использования для этиологической диагностики тяжелой острой респираторной инфекции – COVID-19 с помощью МАНК при исследовании материала от больного (подозрительного на заболевание).

• комплекта реагентов для выделения РНК ручным способом и на автоматизированных станциях KingFisher Flex System «М-Сорб-НК»;
• комплекта реагентов для проведения ОТ-ПЦР-РВ анализа.

Преимущества набора реагентов «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2»

• Анализ по двум генам и двойной контроль

  Набор реагентов использует преимущества мультиплексной ОТ-ПЦР-РВ, а именно: одновременное выявление в одной пробе двух фрагментов РНК коронавируса SARS-CoV-2 (гены orf1ab и N), а также двух контрольных реакций Внутреннего Положительного Контроля по разным каналам детекции флуоресценции.

  Выявление РНК SARS-CoV-2 по двум специфическим фрагментам (каналы детекции R6G и ROX) позволяет обеспечить достоверную и надежную диагностику любых штаммов SARS-CoV-2, в том числе новых вариантов: британского – Alpha (B.1.1.7); южноафриканского – Beta (B.1.351); бразильского – Gamma (Р.1); индийского – Delta (B.1.617.2) и др.

  Наличие двух контрольных реакций Внутреннего Положительного Контроля позволяет оценить:
  - эффективность выделения нуклеиновых кислот (канал детекции FAM);
  - степень ингибирования реакции обратной транскрипции и амплификации (канал детекции Cy5);
  - исключить ложноотрицательные результаты анализа.

• Обратная транскрипция и ПЦР-РВ – в одной пробирке

  Обнаружение фрагментов нуклеиновых кислот коронавируса SARS-CoV-2 реализовано методом обратной транскрипции, совмещенной с полимеразной цепной реакцией в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) в одной микропробирке, что позволяет уменьшить количество манипуляций с реакционной смесью и тем самым максимально снизить количество ошибок и возможность контаминации при постановке ОТ-ПЦР-РВ.

• Наличие различных форматов для удобства пользователей:
  - нераскапанный формат;
  - готовая к использованию лиофилизованная реакционная смесь, расфасованная в стрипованные ПЦР-пробирки (жёсткие или гибкие) или ПЦР-плашки.

  Лиофилизированный формат позволяет транспортировать наборы реагентов при комнатной температуре (без соблюдения «холодовой цепи») и хранить их при температуре от плюс 2°С до плюс 8°С.

Формы выпуска набора «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2»

Набор реагентов выпускается в 4 формах:

• Форма выпуска 1 включает комплект реагентов для выделения РНК ручным способом и на автоматизированных станциях KingFisher Flex System «М-Сорб-НК», комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР-РВ анализа «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2».
• Форма выпуска 2 включает комплект реагентов для выделения РНК ручным способом и на автоматизированных станциях KingFisher Flex System «М-Сорб-НК», комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР-РВ анализа «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2-Л».
• Форма выпуска 3 включает комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР-РВ анализа «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2».
• Форма выпуска 4 включает комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР-РВ анализа «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2-Л».

Формы выпуска 1 и 2 предназначены для проведения полного ПЦР-исследования, включающего экстракцию РНК из клинического материала методом сорбции на магнитных частицах и амплификацию РНК методом обратной транскрипции, совмещенной с полимеразной цепной реакцией в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ).

Формы выпуска 3 и 4 предназначены для проведения амплификации РНК методом обратной транскрипции, совмещенной с полимеразной цепной реакцией в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ). Для проведения полного ПЦР-исследования с использованием форм выпуска 3 и 4 необходимо использовать комплект реагентов для экстракции РНК (например, «РИБО-преп», ФСР 2008/03147).

Комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР-РВ анализа выпускается в вариантах исполнения для жидкой реакционной смеси и лиофилизированной: «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2» и
«ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2-Л» соответственно.

Аналитические характеристики «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2»

• Чувствительность

  Чувствительность – не более 1,0х103 копий РНК в миллилитре пробы (копий·мл-1) с воспроизводимостью не менее 97 %.

• Специфичность

  Специфичность – ложноположительные результаты при анализе образцов НК респираторных инфекций: вирусы тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV), ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV), гриппа типа А (H1N1, H3N2, H7N9, H5N1) и В, респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), аденовирус 5 типа человека, риновирус человека, метапневмовирус человека, коронавирус человека, вирус парагриппа 1 типа, респираторный вирус человека, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae type B, отсутствовали.

Диагностические характеристики «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2»

Эффективность выделения РНК ручным или автоматическим методом одинаковая; эффективность выявления вируса в вариантах исполнения лиофилизированной или жидкой реакционной смеси одинаковая.

* – при исследовании 120 заведомо отрицательных образцов клинического материала определяемый по методу Клоппера и Пирсона

** – при исследовании 96 заведомо положительных образцов клинического материала определяемый по методу Клоппера и Пирсона

Ингибирующего влияния эндогенных (гемоглобин 200 мкг/мл, муцин 5%) и экзогенных (Хлоргексидин 0,5%, Стоматофит 1,5%, Мирамистин 0,001%, раствор Люголя с глицерином 0,5%) потенциально интерферирующих веществ на результат ОТ-ПЦР при исследовании образцов набором «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2» не обнаружено.

Постановка ОТ-ПЦР-РВ осуществляется на приборах для ПЦР-РВ, зарегистрированных в РФ как медицинское изделие и имеющих каналы детекции, соответствующие красителям FAM, R6G, ROX, Cy5 (либо их спектральным аналогам) – «АНК-32»/«АНК-М» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург), «CFX-96» (BioRad, США), «RotorGene» (Qiagen, Германия), «DTprime» («ДНК-Технология», Россия), «QuantStudio» (ThermoFisher Scientific, США).

Интерпретация результатов анализа проб с помощью набора реагентов «ОТ-ПЦР-РВ-SARS-CoV-2»