Набор реагентов «Candidatus Phytoplasma sp.-РВ»
Кат. № PH-48
Фитоплазмы (класс Mollicutes, род Candidatus Phytoplasma) – внутриклеточные фитопатогенные полиморфные микроорганизмы, занимающие промежуточное положение между бактериями и вирусами. Фитоплазменные инфекции могут привести к существенным потерям урожая. Фитоплазмы характеризуются отсутствием клеточной стенки, вместо которой выступает мембрана, имеют сферическую или плейоморфную форму, а их размеры аналогичны размерам микоплазм (80–800 нм). Ввиду данной морфологической особенности, после открытия в 1967 году, они были ошибочно названы микоплазмоподобными организмами (Doi et al., 1967).
Представители рода Candidatus Phytoplasma имеют широкий спектр растений-хозяев, куда входят более 700 видов растений.
У растений фитоплазмы обнаруживаются в основном в элементах флоэмы, включая как зрелые ситовидные трубки, лишенные ядер, так и незрелые клетки флоэмы, у которых есть ядра. Распространение патогена происходит главным образом насекомыми отряда Hemiptera, в основном представителями семейств Cicadellidae, Fulgoromorpha, Psyllidae (Weintraub and Beanland, 2006). Фитоплазмы попадают в тело насекомого через стилет, проходят через кишечник, затем перемещаются в гемолимфу и колонизируют слюнные железы. Весь процесс может занять до 3 недель. Прижившись в насекомом-хозяине, фитоплазмы обнаруживаются в большинстве органов. Помимо распространения через насекомое-вектор, фитоплазмы могут передаваться через повилики (Cuscuta) или вегетативным путем, например, прививкой инфицированного растительного материала здоровому растению.
Поражаемые фитоплазмами растения демонстрируют широкий спектр симптомов: задержка роста, разрастание, генерализованное пожелтение, образование корней неправильной формы, «ведьмина метла» (чрезмерное кущение), филлодия (phyllody - образование листоподобных тканей вместо цветков), виресценция (позеленение цветков), покраснение листьев и стеблей, некроз флоэмы (Hogenhout et al., 2008).
«ФИТОСКРИН» — технология быстрой молекулярно-генетической диагностики заболеваний растений методом ПЦР в реальном времени
«Candidatus Phytoplasma sp.-РВ»
Набор реагентов предназначен для выявления ДНК Candidatus Phytoplasma sp методом полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль карантинного фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала в целях обнаружения ДНК Candidatus Phytoplasma sp. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Candidatus Phytoplasma sp.
Диагностика растений с помощью набора «Candidatus Phytoplasma sp.-РВ» возможна на всех этапах вегетационного развития растения.
Набор реагентов «Candidatus Phytoplasma sp.-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент ДНК Candidatus Phytoplasma sp. (по каналу флуоресценции FAM/Green), а также внутренний положительный контроль – по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow/VIС. Вторая реакция – ВПК (Внутреннего Положительного Контроля) – необходима для исключения ложноотрицательных результатов.
- Специфичность
Специфичность — ложноотрицательные результаты при анализе образцов растений, содержащих целевую ДНК, отсутствовали, ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК близкородственных и сопутствующих организмов, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.
Специфичность набора реагентов «Candidatus Phytoplasma sp.-РВ» была проверена на образцах: Candidatus Phytoplasma vitis, Candidatus Phytoplasma rubi, Candidatus Phytoplasma pyri, Candidatus Phytoplasma mali, Candidatus Phytoplasma convolvuli, Candidatus Phytoplasma asteris, Candidatus Phytoplasma cirsii, Candidatus Phytoplasma taraxacum., Candidatus Phytoplasma prunorum, Candidatus Phytoplasma solani. Остальные виды Candidatus Phytoplasma были проверены биоинформатически.
Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX-96» («BioRad», США), «Rotor Gene Q/6000» (Qiagen/Corbett, США/Австралия ), «DT» («ДНК-технология», Россия), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США)
